الثالوث الحفاز هو مجموعة من ثلاثة بقايا أحماض أمينية منسقة يمكن العثور عليها في الموقع النشط لبعض الإنزيمات. توجد الثالوثات الحفازة بشكل أكثر شيوعًا في إنزيمات الهيدرولاز والترانسفيراز (مثل البروتيازات والأميدازات والإستريزات والأسيلازات والليبازات وبيتا لاكتاماز). يُعد ثالوث حمض-قاعدة-نيوكليوفيل نمطًا شائعًا لتوليد بقية نيوكليوفيلية من أجل الحفز التساهمي. تشكّل البقايا شبكة تتابع شحنات لاستقطاب النيوكليوفيل وتنشيطه، الذي يهاجم الركيزة مكوّنًا وسيطًا تساهميًا يتحلل مائيًا بعد ذلك لتحرير الناتج وإعادة تجديد الإنزيم الحر. النيوكليوفيل غالبًا ما يكون سيرين أو سيستئين، لكن أحيانًا يكون ثريونين أو حتى سيلينوسيستئين. تجمع البنية ثلاثية الأبعاد للإنزيم بقايا الثالوث في توجيه دقيق، حتى وإن كانت متباعدة في التسلسل (البنية الأولية).
إلى جانب التطور التباعدي للوظيفة (وحتى نيوكليوفيل الثالوث نفسه)، تُظهر الثالوثات الحفازة بعضًا من أفضل الأمثلة على التطور التقاربي. أدت القيود الكيميائية على الحفز إلى تطور نفس الحل الحفاز بشكل مستقل في 23 فصيلة عليا منفصلة على الأقل. ونتيجة لذلك تُعد آلية عملها من أكثر الآليات المدروسة في الكيمياء الحيوية.