قلعة ميتيليني أو حصن ميتيليني (باليونانية: Κάστρο της Μυτιλήνης) تقع في مدينة ميتيليني على جزيرة ليسبوس اليونانية في إقليم شمال إيجة. وهي محفوظة في حالة جيدة وتُعد من أكبر القلاع في منطقة البحر الأبيض المتوسط، إذ تمتد على مساحة تبلغ 60 فدانًا.
يُرجّح أن أول بناء للقلعة في هذا الموقع شُيّد خلال عهد الإمبراطور جستينيان الأول (حكم بين عامَي 527 و565). وقد يكون حصن القرن السادس قد أُقيم فوق حصن أقدم كان موجودًا في المكان.
وفي أواخر العصور الوسطى أصبحت القلعة مقر إقامة فرانشيسكو جاتيلوسيو الأول وخلفائه، وبشكل خاص البرج المعروف اليوم باسم برج الملكة. كما توجد أدلة قوية تشير إلى أن الأكروبول الأصلي في الموقع ربما كان يضمّ معبدًا مكرّسًا للألهة ديميتر وكوري وكوبيلي.